基于TurboID鄰近蛋白標(biāo)記技術(shù)鑒定細(xì)胞內(nèi)Smad3相互作用網(wǎng)絡(luò)

摘要： 目的 利用生物素標(biāo)記酶TurboID介導(dǎo)的鄰近標(biāo)記技術(shù),篩選并構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子Smad3的活性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。方法 構(gòu)建一個(gè)含有Smad3和TurboID基因序列的誘導(dǎo)型表達(dá)質(zhì)粒,并通過(guò)慢病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法將其導(dǎo)入Smad3敲除的腎小管上皮細(xì)胞TCMK1中,形成過(guò)表達(dá)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。在建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的基礎(chǔ)上,首先確定了適合的生物素標(biāo)記濃度和時(shí)間,隨后進(jìn)行了生物素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。通過(guò)鏈霉親... ... （共5頁(yè)）